HPLC资料汇编（1）

液相色谱柱的维护

1、  注意正确地使用和存放色谱柱，不锈钢柱色谱柱可选用以下的溶剂保存：正相柱用烃类

2、  溶剂，反相柱用甲醇，离子交换柱用水或甲醇/水。某些专用分析色谱柱要注意制造商规

定的保存条件。另外，要注意溶液的PH值，一般控制在PH2-8范围内，其硅胶柱PH>8

时会发生硅胶溶脱的情况，键合型柱PH<2时会发生键合相断裂。

3、  色谱柱污染后可采用合适的溶剂冲洗，使柱效再生。

（1）       硅胶柱可以使用正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇和水按顺序冲洗色谱柱，经

过净化的色谱柱必须进行水活化，即按上述相反的顺序冲洗。柱再生时所需要的有

机溶剂要严格进行脱水处理。

（2）       反向柱可以用甲醇、氯仿、正庚烷冲洗，键合C18柱一般用甲醇冲洗，必要时可用

0.5MEDTA钠盐溶液冲洗然后用水冲洗，以达到去除柱内盐类。

（3）       键合型的离子交换柱可以用缓冲溶液、水、甲醇冲洗。

4、  对污染严重的色谱柱在冲洗无效时，需将柱内填料取出进行处理或更换新的填料，还可

以用更换柱头填料的方法即将柱头入口处的被污染的填料取出，重新补装和柱内同类型

的填料，然后再改变柱流向进行再生。这种逆流再生柱的方法可以救活大部分柱子。

5、  注入色谱柱的溶剂、标液、样品溶液都必须严格过滤，以去除杂质，防止堵塞色谱柱。

当用反冲洗方法无效时，可将柱口过滤装置取下，用弱酸溶液处理，去除污物或定期更换。

6、  建议：为了保护色谱柱，避免给分析带来不必要的麻烦，请使用保护柱！！

液相色谱柱子使用经验谈

色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的

参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；

另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测试所使用的条件是最

佳条件），只有这样，测试的结果才有可比性。

1、  样品的前处理：

a、  最好使用流动相溶解样品。

b、  使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。

c、  使用0.45um的过滤膜过滤除去微粒杂质。

2、  流动相的配制：液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目

的，因此要求流动相具备以下的特点：

a、  流动相的样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中（或长时间保留在柱中）。

b、  流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应（特殊情况除外）。

c、  流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降

低柱压降，延长液体泵的使用寿命（可运用提高温度的方法降低流动相的黏度）。

d、  流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外

吸收较低的溶剂配制。

e、  流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。

f、   在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检

测还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。

3、  流动相的流速的选择：因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不

同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6

㎜的色谱柱，流速一般选择1ml/min，对于内径为4.0㎜柱，流速0.8 ml/min为佳。当

选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析

时间（如使用反相柱时可适当增加甲醇或乙腈的含量）。

注意：

a、  由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系（必须使用乙腈的场合除外）。

b、  由于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的乙烷做流动相，没有提纯

的乙烷不得使用。用水最好使用超纯水（电阻率大于18兆欧），去离子水及双蒸水

中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。

c、  含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。最

好加入叠氮化钠，防止细菌生长。

d、  流动相要求使用0.45um滤膜过滤，除区微粒杂质。