请教分光光度计的分辩率,谱宽,及其检定

请教分光光度计的分辩率,谱宽,及其检定

分光光度计的分辨率、谱宽及其检定
                                                                                      国新
    分光光度计的分辨率是指仪器分开紧密相邻的二谱线的能力，是光谱仪器的重要技术指标，在紫外可见分光光度测试中，人们利用仪器自身光源(氢灯或氘灯)的特征发射光谱线，以单光束方式通过设定的狭缝后单色光的峰波的半幅度??作为“谱宽”，以最小可设定狭缝下测得的谱宽作为仪器的“分辨率”。
测定仪器单光色的实际谱宽与标称值的符合程度即分辨率或谱宽的检定。不同类型的仪器的测试方法不同，现分述如下。
     采用光栅为单色器的非记录型单光束紫外可见分光光度计（如WFZ—800D），测试时可先将狭缝拨至0.5mm档，开启氘灯及光电倍增管电源，波长旋至656nm附近，粗调透射比约为50%（T），再微动波长旋钮使透视比读数至最大，记下数值。左右偏调波长旋钮，使透视比读数至最大，记下数值，左右偏调波长旋钮，找出接近该峰值之半的两个波长，其差值即为谱宽（nm），同法测定其余各档的谱宽。
     采用光栅、双光栅或棱镜-光栅为单色器的自动记录式紫外可见分光光度计（如岛津UV-365.日立U-3200等），测试时先设定在单光束方式，以氘灯为光源，在656nm附近扫描，能量档次随设定狭缝作相应调整，使峰高为30%~80%T，打印出光谱图，用游标卡尺量出峰高值，再找出半峰高相应的两个波长，量出谱宽或最小谱宽即分辨率（见图1）。我们对日立U-3200、岛津UV-365、765，WFZ-800D2、岛津UV-120-02等多种类型的紫外可见分光光度计进行了测试，其各档谱宽或分辨率均在标称值?20%的范围内。


图1  1、2、3分别为谱宽2、0.5、0.1nm的光谱曲线
    谱宽是分光光度计的重要技术指标，有些单光束非记录型紫外可见分光光度计只有一个较宽的狭缝（谱宽5~8nm），不能应用药典提供的E cm值，不适于药品的定量测定和鉴别检查，仅可作为“比色”用；有些自动~3nm，对于一些吸收光谱尖锐的药品的鉴别、检查亦不适用。
    中国药典（1990年版）规定：仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度会偏低。这就是因供试品吸收光谱的谱宽而选择仪器单色光的谱宽的基本原则。实际上，分辨率若优于0.1nm，适用于测试物质的精细光谱结构，稍宽（0.15~0.5nm）也能满足药物的定性鉴别或限度检查的测试要求；定量分析宜选择谱宽为1~2nm。谱宽过宽，仪器的单色光纯度差，往往造成压低峰高，抬高谷底而歪曲供试品的吸收光谱导致定量关系偏离比耳定律。谱宽过窄，光能量弱，仪器的信噪比差，定量误差大。此外，谱宽对峰--峰，峰--谷比值；对峰，肩峰，谷值的鉴别、检查项目有不容忽视的影响，应根据供试品的吸收光谱的尖锐程度，审慎选择适宜的谱宽。